Plenti6.3/V5-TERT慢病毒载体的构建并成功建立永生化大鼠骨髓间充质干细胞系的研究

作者：黄炜; 吕安林; 刘博武; 侯静; 侯兆蕾; 达晶; 侯红

来源：中华临床医师杂志(电子版), 2012, (10): 2608-2613.

• 间质干细胞
• TERT基因
• 慢病毒载体
• 永生化 Mesenchymal stem cells
• TERT gene
• Lentivral vector
• Immortalization

目的为实现慢病毒感染后可用抗生素筛选TERT基因稳定整合的骨髓间充质干细胞,首先对pCI-neo-TERT质粒进行了改造和构建。方法将pCI-neo-TERT酶切后得到TERT片段,并进行PCR扩增,将得到的TERT片段连入Plenti6.3/V5,酶切鉴定载体构建正确后,将改造和构建载体分别与辅助质粒psPAX2、pMD2.G共转染HEK-293T包装细胞,收获病毒上清并感染靶细胞,使用相应抗生素筛选细胞,验证抗性基因的插入。结果成功构建了重组慢病毒载体Plenti6.3/V5-TERT,通过调整病毒上清的用量可以使靶细胞达到很高的感染效率;用相应抗生素筛选细胞证明了抗性基因的表达。结论我们...

• 单位
  西京医院; 第四军医大学