基于时间相关单光子计数的离线式g-STED超分辨显微术

作者：郝翔; 匡翠方; 顾兆泰; 李帅; 刘旭

来源：中国激光, 2013, 40(01): 127-131.

• 显微
• 荧光寿命成像
• 时间相关单光子记数算法
• 时间门荧光受激发射损耗显微

提出了一种离线式基于时间门的荧光受激发射损耗(g-STED)显微方法。基于在强光照条件下荧光寿命缩短的理论模型,在常规STED架构基础上,使用时间相关单光子记数(TCSPC)算法获取图像的荧光寿命信息,离线设置合理的时间门阈值,丢弃短寿命信号数据,对荧光信号有效点扩展函数(PSF)进行压缩,达到超分辨显微的目的。与传统STED显微术相比,此方法所需光功率大幅度降低,减少了荧光漂白及光毒性;离线式处理则同时增加了时间门设置的灵活性。在实验中,使用45mW的连续STED光,最终获取了约80nm的图像空间分辨率。进一步对时间门的设置对获取图像信号的分辨率和信噪比的影响进行了讨论。

• 单位
  浙江大学; 现代光学仪器国家重点实验室