基于枯草芽孢杆菌重组菌株构建技术制备海洋源金属硫蛋白

作者：阎光宇; 孙继鹏; 易瑞灶; 苏永全

来源：渔业研究, 2018, 40(02): 89-97.

DOI：10.14012/j.cnki.fjsc.2018.02.001

• 枯草芽孢杆菌
• 海洋源金属硫蛋白
• 可溶性融合蛋白

为构建安全高效表达海洋源金属硫蛋白的益生菌重组菌株,以海洋源褶牡蛎内脏团为模板,PCR克隆得到褶牡蛎金属硫蛋白基因(Op-MT),大小为324 bp,经pMD19-T载体亚克隆到融合表达载体pHT43-SUMO中,然后通过电转化法将重组质粒转入八种蛋白酶缺陷的宿主枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WB800N中。SDS-PAGE电泳显示诱导表达的融合蛋白SUMO-Op-MT分子量约为23 kD,与预期一致,说明可溶性融合蛋白SUMO-Op-MT在宿主菌中得到了表达,且通过Western blotting进一步得到验证。同时,HPLC检测重组枯草芽孢杆菌发酵液,结果也表明重组枯草芽孢杆菌成功表达了可溶性目的蛋白Op-MT。通过对重组工程菌中MT活性检测发现,其对重金属镉耐受力增强,说明重组工程菌成功表达出有活性的金属硫蛋白。这为以后开发天然、高效海洋源重金属解毒剂提供理论基础。

• 单位
  厦门大学; 国家海洋局第三海洋研究所; 厦门海洋职业技术学院