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摘要
为了探究天然原肌球蛋白的可替代物，为虾类过敏的诊断和治疗提供基础材料，本研究从河虾中提取总RNA，利用cDNA末端快速扩增技术克隆河虾过敏原原肌球蛋白基因的全长序列。以此序列设计表达引物，构建表达载体，最后通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-Thiogalactopyranoside， IPTG)诱导表达重组原肌球蛋白。结果显示，河虾的原肌球蛋白基因cDNA序列全长1658 bp，开放阅读框855 bp，编码284个氨基酸，预测蛋白等电点4.70，预测分子量32.8 kD。河虾原肌球蛋白cDNA序列已登入GenBank数据库，登录号为OP974621。本研究成功构建河虾原肌球蛋白重组表达质粒pET-30a-TM，并用IPTG进行体外诱导表达，最佳诱导条件为IPTG浓度1 mmol/L，37 ℃诱导4 h。可溶性分析发现重组原肌球蛋白主要以可溶性形式存在于细胞破碎液的上清液中，分子量约38 kD。
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