LAT基因簇miRNA的CRISPR/Cas9基因编辑对马立克病病毒体外复制的影响分析

作者：楚钰淑; 滕蔓; 周子誉; 石彬; 郑鹿平; 刘金玲; 罗俊; 张改平^*

来源：病毒学报, 2021, 37(06): 1428-1439.

DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003947

• MDV
• CRISPR/Cas9
• 基因编辑
• miRNAs
• LAT基因簇
• 调控功能

病毒编码的microRNA(miRNA)在马立克病病毒(MDV)的复制、潜伏感染及诱导肿瘤发生中发挥重要的调控功能。血清1型MDV(MDV-1)编码的26个成熟体miRNA在基因组中形成3个基因簇,分别命名为Meq、Mid和LAT miRNA基因簇。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以超强毒株(vvMDV)国内代表株GX0101为研究对象,设计并合成一系列可实现LAT基因簇miRNA编辑缺失的特异性gRNA组合,成功构建了一株LAT基因簇miRNA缺失毒株GX?LAT-miRs-C21-15。经DNA测序分析、IFA鉴定及RT-qPCR分析,证实LAT基因簇miRNA被完全编辑缺失。该基因缺失毒株传代稳定性良好,miRNA的缺失不影响MDV的体外复制及相关基因表达。本研究基于CRISPR/Cas9系统,获得了稳定的LAT基因簇miRNA编辑缺失毒株,为后续相关miRNA的功能研究奠定了重要基础。

• 单位
  动物科技学院; 河南农业大学; 农业部; 生命科学学院; 扬州大学; 河南科技大学; 河南省农业科学院