结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达及膜定位研究

作者：李浩; 殷瑛; 毛亚丽; 董大勇; 张军; 付玲; 郭继红; 徐俊杰; 陈薇

来源：中国生物工程杂志, 2011, 31(05): 55-59.

DOI：10.13523/j.cb.20110509

• 结核分枝杆菌
• ESAT-6
• 纯化
• 免疫荧光 Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 Purification Immunofluorescence

从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因,克隆入pET21a(+)载体。将成功构建的pET21a(+)-ESAT-6重组质粒转化入感受态BL21(DE3)中,经诱导表达后,使用SDS-PAGE和Western blot鉴定。超声破碎后发现目的蛋白以可溶性表达形式存在,经过Ni-NTA柱和DEAE-SepharoseTMFast Flow柱纯化,获得纯度约为95%的重组ESAT-6蛋白。将目的蛋白和RAW264.7细胞共孵育后,使用免疫荧光技术发现ESAT-6蛋白能够直接和RAW264.7的细胞膜结合。

• 单位
  中国人民解放军空军总医院; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院