阿伐他汀通过调控AMPK/Akt/mTOR信号逆转白血病顺铂耐药的作用及机制

作者：刘苗; 周攀

来源：热带医学杂志, 2022, 22(04): 518-524.

• 阿伐他汀
• 白血病
• 顺铂
• 耐药
• AMPK/Akt/mTOR通路

目的 探讨阿伐他汀对耐顺铂的人慢性髓系白血病耐药株K562/DDP化疗增敏的作用及机制。方法 取对数生长期耐顺铂的白血病细胞K562/DDP，设对照组、顺铂（5μmol/L）组、阿托伐他汀（10μmol/L）组、阿伐他汀（10μmol/L）+顺铂（5μmol/L）组。采用CCK8法测定细胞增殖活性；流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡作用，Westernblot方法检测羟甲基戊二酰辅酶A还原酶（HMGCR）、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的表达。将p-AMPK-siRNA转染至K562/DDP细胞后，进一步采用上述方法检测p-AMPK低表达对阿伐他汀调节K562/DDP细胞凋亡及p-Akt/p-mTOR信号通路的影响。结果 CCK结果表明，随着顺铂浓度的增加，K562/DDP和K562细胞生存率逐渐降低。K562/DDP细胞的半数抑制浓度IC50值明显高于K562细胞（t=4.376,P<0.05）。流式结果显示，与单用顺铂组比较，阿伐他汀联合顺铂处理后G1期细胞比例明显升高（t=4.617,P<0.05）,S期细胞比例明显降低（t=7.277,P<0.05）；阿伐他汀联合顺铂处理后显著促进K562/DDP细胞凋亡（t=5.871,P<0.05）。Western blot结果表明，与单用顺铂组比较，阿伐他汀联合顺铂处理后显著抑制HMGCR蛋白的表达（t=4.929,P<0.05），显著下调Bcl-2蛋白的表达（t=3.899,P<0.05），上调Bax和caspase-3蛋白的表达（t=5.325、7.533,P均<0.05）；阿伐他汀联合顺铂处理后显著促进p-AMPK蛋白的表达（t=5.178,P<0.05），抑制p-Akt和p-mTOR蛋白的表达（t=7.236、6.317,P均<0.05）。进一步将p-AMPK-siRNA转染至K562/DDP细胞后，结果显示低表达p-AMPK减弱了阿伐他汀联合顺铂对K562/DDP细胞p-Akt/p-mTOR信号途径的抑制作用，减弱了对K562/DDP细胞凋亡的促进作用。结论 阿伐他汀具有增强慢性髓性白血病细胞株K562/DDP对顺铂化疗敏感性的作用，阻滞细胞在G1期，诱导细胞凋亡，推测机制可能通过抑制HMGCR表达，促进pAMPK激活，抑制p-Akt/p-mTOR信号途径有关。

• 单位
  武汉大学人民医院