细胞DNA中8-OH-dG的毛细管区带电泳检测方法的研究

作者：徐永俊; 徐顺清; 周宜开

来源：卫生研究, 2005, (05): 539-542.

• 毛细管区带电泳(CZE)
• 8-羟基-2′-脱氧鸟嘌呤核苷(8-OH-dG)

目的以人肝肿瘤细胞HepG2为工具细胞,通过优化选择毛细管区带电泳的运行电压、温度、缓冲溶液pH值等条件,建立细胞DNA氧化损伤后8OH dG的毛细管区带电泳分离检测方法,并以此方法分别检测未经H2O2处理组与经15mmol LH2O2处理组HepG2细胞DNA中8OH dG含量的变化。方法提取DNA采用饱和盐析法,避免经酚氯仿抽提导致8OH dG的产生。DNA溶液中加入DNaseI、蛇毒磷酸二酯酶及碱性磷酸酶得到游离核苷,并经去蛋白,二乙醚抽提后用于HPCE分析。优化后的分析条件为紫外检测器波长为254nm;pH值为9.5,浓度为20mmol L硼酸钠水溶液;毛细管长度为47cm;运行电压为25kV;温度为25℃;进样方式为重力进样,进样时间为20秒。结果在上述实验条件下,细胞DNA处理得到的游离核苷电泳结果与5种核苷标准品的电泳结果符合。经或未经H2O2处理组HepG2细胞DNA中均检测出8OH dG峰,H2O2处理组细胞DNA中8OH dG含量增加。结论此方法操作简便易行,进样量小,需时间及费用少,灵敏度较高,对人体无损害,并为8OH dG在人群生物监测方面的应用奠定了实验基础。

• 单位
  中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所; 华中科技大学同济医学院