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摘要
目的：探究整合ICOS共刺激结构域的三代CAR-T细胞是否可对肺癌产生显著抗肿瘤活性。方法：采用慢病毒感染法构建二代CAR-T细胞（MSLN-BBz CAR-T）及三代CAR-T细胞（MSLN-ICOSBBz CAR-T），流式细胞术检测CAR-T细胞阳性率、效靶细胞共孵育后T细胞CD69表达以及肿瘤浸润T细胞抗肿瘤表型；荧光显微镜观察效靶细胞共孵育后T细胞增殖情况；活体成像检测肺癌细胞在小鼠体内的生长情况；HE染色检测CAR-T细胞对主要脏器的毒性。结果：流式细胞术结果显示，成功采用慢病毒构建MSLN-BBz CAR-T及MSLN-ICOSBBz CAR-T，阳性率约为40%；效靶细胞共孵育后，MSLN-ICOSBBz CAR-T较MSLN-BBz CAR-T CD69表达显著升高（P<0.001），同时MSLN-ICOSBBz CAR-T靶细胞杀伤能力更强（P<0.001）；小鼠移植瘤模型显示，MSLN-ICOSBBz CAR-T比MSLN-BBz CAR-T拥有更强的体内抑瘤能力（P<0.01）；肿瘤浸润T细胞分析发现，相较于MSLN-BBz CAR-T,MSLN-ICOSBBz CAR-T IFN-γ表达更高（P<0.000 1）,PD-1表达则较低（P<0.000 1），提示其肿瘤杀伤活性更好；HE染色结果显示，MSLN-BBz CAR-T及MSLN-ICOSBBz CAR-T均未对主要脏器造成明显损伤。结论：ICOS协同4-BB共刺激结构域可显著提高CAR-T细胞对肺癌的抗肿瘤活性，为MSLN-ICOSBBz CAR-T对肺癌治疗的进一步探索提供了依据。
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