基于登革病毒噬菌体展示文库的E蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定

作者：陈玲玲; 范瑞文; 何雷; 贾琼; 秦蓉芬; 陈玉红; 李雷斌; 黄袁慧; 刘玉良; 李义平^*; 王传彬^*

来源：中国动物传染病学报, 2023, 1-9.

DOI：10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20230323.003

• 血清II型登革病毒
• E蛋白
• 纳米抗体
• 噬菌体展示

登革病毒(Dengue virus， DENV)是一种经伊蚊传播的人兽共患病毒，目前没有特异性抗DENV药物和安全且高效的疫苗。为制备可中和DENV的纳米抗体，本研究构建血清II型DENV(DENV-2)特异性噬菌体展示文库，并筛选DENV E蛋白特异性纳米抗体。首先将灭活并浓缩的DENV-2免疫羊驼，采血分离外周血单核细胞(PBMC)并提取总RNA，通过RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)并克隆入pCANTAB-5E质粒，构建成DENV特异性纳米抗体噬菌体展示文库。然后，以DENV-2 E蛋白为抗原淘筛纳米抗体库。将筛选到的2个VHH片段克隆入pPICZαA载体后在毕赤酵母(GS115株)中表达，并纯化抗体。最后，鉴定纯化的纳米抗体与E蛋白的反应性。结果显示：成功构建库容为9.1 × 108个的噬菌体展示文库；经3轮淘筛获得1株与DENV-2 E蛋白特异结合的纳米抗体DV2-Nb2。本研究为DENV诊断和抗体药物研发提供实验技术基础。

• 单位
  山西农业大学; 中国动物疫病预防控制中心; 广西大学; 中山大学中山医学院