沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

作者：陈艳^*; 潘殿柱; 刘忠; 马艳梅; 张岚

来源：吉林大学学报(医学版), 2020, 46(04): 751-758.

DOI：10.13481/j.1671-587x.20200414

• 重组蛋白2
• Wnt/β连环蛋白信号通路
• 小细胞肺癌
• 细胞增殖
• 增殖细胞核抗原
• 细胞周期蛋白D1
• 糖原合成酶激酶3

目的:探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2 (Frat2)通过Wnt/β连环蛋白(β-catenin)信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法:选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应(RealTime RT-qPCR)法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4μmol·L-1 Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)、c-myc、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3 (pGSK-3β)蛋白表达水平。结果:与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高(P<0.05);空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低(P<0.05),G0/G1期细胞百分率升高(P<0.05),S期和G2/M期细胞百分率降低(P<0.05),PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05);与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低(P<0.05),G0/G1期细胞百分率升高(P <0.05),S期和G2/M期细胞百分率降低(P<0.05),PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低(P<0.05);空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

• 单位
  锦州医科大学