柔嫩艾美耳球虫组蛋白去乙酰化酶2A基因的克隆表达及转录动态分析

作者：左云云; 马雪婷; 龚振兴; 殷昊; 刘保红; 韩政岚; 蔡建平

来源：畜牧与兽医, 2016, 48(10): 7-12.

• 柔嫩艾美耳球虫
• 沉默信息调节因子2A
• 表达差异
• qRT-PCR

为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)组蛋白去乙酰化酶2A(Et Sir2A)的生化功能及其对生活史发育的潜在调节作用,以柔嫩艾美耳球虫甘肃株为例,检测其在不同发育阶段表达量的差异。以基因组数据预测的编码序列为模板设计引物,采用RT-PCR的方法扩增得到Et Sir2A的全长ORF,构建p MAL-C2X-Et Sir2A重组表达质粒并进行原核表达;提取未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段/时期的总RNA,采用qRT-PCR方法检测Et Sir2A的转录动态变化。测序结果显示,克隆的Et Sir2A ORF序列全长909 bp,编码302个氨基酸,并能在大肠杆菌原核系统中成功表达;qRT-PCR结果显示,Et Sir2A在不同发育阶段mRNA转录水平差异显著,在未孢子化卵囊阶段最高,第二代裂殖子阶段最低。结果为进一步研究Et Sir2A功能和开发新型抗球虫药物提供了数据基础。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室