抗人FXYD6特异性多肽单克隆功能性抗体制备及生物学作用鉴定

作者：陈雄飞; 袁俊建; 张执全; 郭忠健; 郭尧; 刘汝海; 李凤山

来源：重庆医学, 2018, 47(10): 1309-1313.

• 转运调节因子6
• 单克隆抗体
• 制备
• 生物学鉴定

目的研制抗人转运调节因子(FXYD)6功能区单克隆抗体库,筛选分泌胞内、胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株并对鉴定胞外区单克隆抗体生物学作用。方法原核表达并纯化去除跨膜区域FXYD6功能区重组蛋白,FXYD6重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,多次筛选及克隆化,建立稳定分泌抗人FXYD6胞外区或胞内区的单克隆抗体杂交瘤。分别应用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、Western blot和免疫组织化学法鉴定抗体特异性及亚型,细胞流式技术筛选可识别天然构象的胞外区单克隆抗体,用腹水诱导法对胞外区单抗进行制备、纯化并检测亲和常数,高表达FXYD6的HepG2细胞系检测胞外区单抗的功能。结果成功获得分泌抗人FXYD6胞外区或胞内区单克隆抗体的杂交瘤细胞库,制备出具有功能阻断性的胞外区单抗。结论制备的抗人FXYD6胞外区单抗可抑制HepG2细胞的增殖。

• 单位
  中心实验室; 沧州市中心医院