特异腐质霉来源漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

作者：张丽洁; 徐欣欣; 田健; 初晓宇^*; 朱宝成^*; 伍宁丰

来源：中国农业科技导报, 2019, 21(02): 46-53.

DOI：10.13304/j.nykjdb.2018.0196

• 漆酶
• 基因克隆
• 异源表达
• 毕赤酵母

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,在有机农药残留和木质素的降解方面具有潜在的工业价值。从特异腐质霉Y1(Humicola insolens Y1)中分离到了漆酶基因Lac1,其全长1 803 bp,编码600个氨基酸,与NCBI蛋白数据库比对结果表明,与来源于Chaetomium globosum CBS 148.51(XP001228806)的多酚氧化酶序列相似性最高为71%,表明是一个新的漆酶基因。将其克隆入毕赤酵母表达载体pPIC9r中,通过PCR和SDS-PAGE检测证实基因已经整合入酵母基因组中且能分泌表达。在3 L发酵罐中,重组Lac1蛋白表达量达到3.79mg/mL发酵液,酶活性达到1.3 U/mL发酵液。酶学性质分析结果显示,漆酶的最适作用温度为65℃,最适反应pH为4.5,且在pH 6～11的范围内酶的相对活力均在70%以上。

• 单位
  河北农业大学; 中国农业科学院生物技术研究所; 生命科学学院