2011—2015年安阳地区手足口病相关人肠道病毒B种病原组成及柯萨奇病毒B2、B5 VP1基因特征分析

作者：李洋; 张相萍; 翟明强; 黄学勇^*; 李懿

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2016, 36(06): 435-441.

• 手足口病
• 肠道病毒
• 柯萨奇病毒B2
• 柯萨奇病毒B5
• 系统发育树
• 正向选择压力

目的调查2011—2015年安阳地区手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)相关人肠道病毒B种(HEV-B)病原组成, 对柯萨奇病毒B2(CVB2)和柯萨奇病毒B5(CVB5)VP1基因特征进行研究。方法使用实时荧光逆转录PCR和半巢式逆转录PCR法对柯萨奇病毒A16(CVA16)、肠道病毒71(EV71)以及其他肠道病毒进行鉴定, 以获得完整的手足口病病原组成, 统计出HEV-B病原种类及阳性比例。针对HEV-B病原中阳性病例数较多的CVB2和CVB5病原, 分别以其VP1基因为靶段设计引物PCR扩增测序后获得VP1基因核苷酸序列全长。使用MEGA7.0和BioEdit7.2软件对本研究获得的CVB2、CVB5序列以及GenBank数据库已收录的全部相关VP1序列构建系统发育树并进行系统发育分析。使用DateMonkey在线分析程序对我国近年来流行的CVB2和CVB5毒株的VP1基因进行选择压力分析。结果 2011—2015年安阳地区共鉴定出手足口病相关HEV-B病原14种, HEV-B阳性标本57份。HEV-B病原占手足口病全部病原种类的比例为56%, HEV-B阳性标本占总肠道病毒阳性标本的比例为3.06%。绝大多数HEV-B病原引起的手足口病呈高度散发, 个别病原如CVB2、CVB5在特定时间内的病例较为聚集。经过测序获得安阳地区8条CVB2和9条CVB5 VP1序列。构建的系统发育树显示, CVB2毒株可分为A～D四个基因型, 各基因型的组间平均进化距离介于0.191～0.208, 核苷酸序列相似性介于79.7%～85.8%。CVB5毒株可分为A～F六个基因型, 各基因型的组间平均进化距离介于0.170～0.285, 核苷酸序列相似性介于76.0%～86.8%。CVB2 VP1基因氨基酸序列第157、263位, CVB5 VP1基因氨基酸序列第75、90、95位在不同基因型毒株中的残基有较大差异。安阳地区CVB2序列均属于D基因型, 且集中于1个分支内;CVB5序列均属于F基因型, 分布于其中2个分支内。中国大陆地区近年流行的CVB2(D基因型)和CVB5(F基因亚型)毒株的进化选择压力ω值分别为0.037、0.036, 未发现CVB2 VP1基因的正选择氨基酸位点, 但在CVB5 VP1基因中发现6处正选择氨基酸位点。结论 HEV-B是安阳地区2011—2015年手足口病病原谱的重要组成。CVB2、CVB5在安阳地区手足口病HEV-B病原中占有一定优势, 其中CVB5 VP1基因比CVB2 VP1基因具有更为复杂和活跃的进化特征。

• 单位
  河南省疾病预防控制中心; 安阳市疾病预防控制中心