PTD-NPY融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达

作者：孙玉成; 周凤秋; 万家余; 高宏伟

来源：生物工程学报, 2008, (09): 1620-1624.

DOI：10.13345/j.cjb.2008.09.012

• 蛋白转导
• 神经肽Y(NPY)
• 融合基因
• 克隆
• 分泌表达 protein transduction
• neuropeptide Y (NPY)
• fusion gene
• cloning
• secretory expression

应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY。PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶SacI线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌GS115的染色体基因组中。阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达。经过120h的诱导,取上清浓缩除盐后进行SDS-PAGE电泳,表明该系统成功表达了PTD-NPY融合蛋白,Western blotting实验证实表达产物具有特异性。获得真核表达的PTD-NPY融合蛋白,为下一步的应用研究...

• 单位
  军事医学科学院军事兽医研究所