小鼠睾丸体外生精小管模型构建及Rho/ROCK信号通路对其重构的影响

作者：孙梦迪; 李春阳; 刘松坡; 李小明; 徐睿; 兰东锋; 代小方; 张继东^*

来源：遵义医科大学学报, 2022, 45(02): 147-152.

DOI：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2022.0044

• 生精小管形成
• 支持细胞
• Rho/ROCK信号通路

目的 构建小鼠睾丸体外生精小管模型，探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管重构过程中的作用。方法 取新生10日龄小鼠睾丸，分离纯化睾丸支持细胞(Sertoli cells, SCs),培养3 d后利用免疫荧光染色技术检测分离细胞GATA结合蛋白4(GATA Binding protein 4,GATA4)表达情况，鉴定SCs纯度；以RPMI 1640为阴性对照组(cont组),人工合成血清替代物(KnockOutTM Serum replacement, KSR)和FBS为实验组，倒置显微镜下观察原代SCs生精小管形成情况，建立生精小管体外培养模型；分别以RPMI 1640培养基组和KSR组为阴性对照和阳性对照组，以KSR+Y27632(K+Y)、缓激肽(Bradykinin, BK)为实验组，探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管形成过程中的作用。结果 (1)免疫荧光染色结果显示在分离得到的细胞中GATA4+DAPI+SCs占90%以上；(2)倒置显微镜下观察到与cont组相比，随着培养天数的增加，KSR组有大量管状结构形成，而FBS组只观察到细胞生长，并未有管状结构形成；(3)添加ROCK分子抑制剂Y27632后镜下观察到的管状结构被明显抑制，而当添加Rho/ROCK信号通路激动剂BK后，我们观察到类似于KSR组管状结构的形成。结论 Rho/ROCK信号通路参与小鼠睾丸体外生精小管结构的形成。

• 单位
  遵义医科大学