基于非对称发夹探针的杂交链反应技术应用于病原菌检测的实验研究

作者：夏涵; 黄君富; 梁盼盼; 黄庆; 府伟灵

来源：中华医院感染学杂志, 2012, 22(20): 4452-4455.

• 肺炎克雷伯菌
• 发夹DNA探针
• 杂交链反应

目的应用基于非对称发夹探针的杂交链反应技术,检测肺炎克雷伯菌不对称PCR产物,建立一种新的病原菌快速检测方法。方法采用Array Designer 4.0软件,针对肺炎克雷伯菌的16SrDNA可变区域设计非对称发夹式DNA探针,优化探针浓度,以不对称PCR扩增肺炎克雷伯菌16rDNA可变区所制备的单链DNA为靶序列,采用HCR进行检测和分析。结果 HCR体系中发夹探针最佳浓度为1μmol/L;当靶序列初始浓度≥0.05μmol/L时,通过琼脂糖凝胶电泳可观察到明显的HCR聚合物;不对称PCR法制备的单链DNA可以启动杂交反应。结论应用基于非对称发夹探针的杂交链反应技术检测病原菌具有反应体系简单,无需酶促反应等优点,可对血流感染病原菌基因组进行简便、快速、特异的检测。

• 单位
  第三军医大学第一附属医院