脂质体RNAiMAX介导siRNA转染沉默胰岛素瘤NIT-1细胞血管紧张素Ⅱ1型受体基因的实验研究

作者：莫丽雯; 卢德成; 李海滨

来源：广西医科大学学报, 2016, 33(05): 770-773.

DOI：10.16190/j.cnki.45-1211/r.2016.05.003

• NIT-1细胞
• RNA干扰
• 血管紧张素Ⅱ1型受体
• 基因沉默

目的:探讨脂质体RNAiMAX能否介导小干扰RNA(siRNA)转染入胰岛素瘤NIT-1细胞并实现血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)的基因沉默,同时评价其细胞毒性。方法:针对AT1R,设计合成3对siRNA序列,转染NIT-1细胞,荧光显微镜下观察RNAiMAX能否介导荧光分子Cy3标记的siRNA转入细胞内,以及不同siRNA浓度对转染效率的影响;Real-time PCR检测AT1R mRNA的相对表达量,计算基因沉默效率并探讨不同干扰序列及干扰时间对其影响;流式细胞仪检测si-AT1R组、脂质体组和空白组的凋亡率。结果:荧光显微镜观察发现,在一定范围内,5个浓度siRNA转染时,细胞荧光强度均达90%以上,以40nmol/L的荧光强度最高;AT1R的3对序列(si-AT1R-1、si-AT1R-2、si-AT1R-3)转染24h沉默效率分别为86.07%、92.20%、74.67%,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),以si-AT1R-2的沉默效率最高,检测其24h、48h、72h的沉默效率,显示24h的沉默效率最高;各组细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:脂质体RNAiMAX可以介导siRNA转入NIT-1细胞中并实现AT1R基因的沉默,40nmol/L si-AT1R-2转染24h可达到理想的沉默效果;此方法对细胞基本无毒性作用。

• 单位
  广西医科大学第一附属医院; 中国人民解放军第三〇三医院