调控NF-κB信号通路对大鼠脑星形胶质细胞继发性死亡的影响

作者：莫伟; 陈兵^*; 林亨; 邹新辉; 龙霄翱; 梁远生; 尹延庆; 黄梓雄; 谈山峰

来源：中华神经医学杂志, 2015, 14(10): 983-988.

• 星形胶质细胞
• 细胞核因子-κB
• 继发性死亡

目的观察干预细胞核因子-κB(NF-κB)信号通路对星形胶质细胞(AST)自噬、凋亡和坏死的影响。方法取纯化AST分成3组:(1)空白组:加入2 μL PBS液1 h后, 再加入2 μL PBS液;(2)激活组:加入2 μL PBS液1 h后, 再加入2 μL NF-κB激活剂PMA(终浓度1 μmol/L);(3)抑制组:先加入2 μL NF-κB阻断剂PDTC(终浓度20 μmol/L)预处理1 h, 再加入2 μL PMA(终浓度1 μmol/L)。各组细胞分别处理1、6、12、24、48 h, 应用免疫细胞化学荧光法测定NF-κB蛋白的表达, 应用Annexin V/PI染色法检测凋亡和坏死, 应用Western blotting检测自噬蛋白Beclin 1表达情况。结果 (1)随着作用时间增加, NF-κB蛋白表达量也逐渐增高, 24 h时空白组、激活组及抑制组表达量分别为0.27±0.46、3.13±0.35、2.00±0.53, 差异有统计学意义(P<0.05)。(2)各组细胞凋亡及坏死程度也随着作用时间增加而相应增高。激活组AST凋亡程度总体高于空白组与抑制组, 12、24、48 h时间点3组细胞两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。激活组AST坏死程度总体高于空白组与抑制组, 24 h、48 h时间点3组细胞两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)激活组Beclin 1蛋白各时间点均较抑制组及空白组明显增加, 6 h时空白组、激活组及抑制组Beclin 1蛋白表达量分别为0.17±0.01、0.59±0.03、0.51±0.03, 两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PMA诱发的NF-κB活化能够引起AST不同程度的凋亡、坏死及自噬进程, 早期以凋亡和自噬为主, 晚期以坏死为主, 而PDTC能够在一定程度上抑制NF-κB通路所诱导的这些死亡进程。

• 单位
  广东医学院附属医院