miR-106b表达对人肝细胞肝癌细胞增殖能力的影响

作者：申刚; 嘉红云; 陈德基; 张靖

来源：中华肿瘤杂志, 2014, 36(07): 489-495.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0253-3766.2014.07.003

• 肝肿瘤
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 微RNAs

目的探讨miR-106b的表达对肝细胞肝癌(HCC)细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法实时荧光定量PCR检测HCC细胞系和正常肝上皮细胞中miR-106b的表达。以miR-106b模拟物和miR-106b抑制物转染HepG2和QGY-7703,采用四甲基偶氮唑蓝法、克隆形成实验和软琼脂增殖实验检测miR-106b的表达对QGY-7703和HepG2细胞增殖能力的影响,BrdU竞争掺入法、流式细胞仪检测细胞新合成DNA的能力和细胞周期的变化。结果 HepG2、QGY-7703、BEL-7402、MHCC97H、HCCC-9810、Hep3B、MHCC97L和Huh7细胞中miR-106b的相对表达水平分别为5.37±0.35、8.45±0.75、19.22±1.74、11.93±1.26、17.03±0.97、4.19±0.67、7.94±1.35和3.82±0.87,与正常肝上皮细胞THLE3中miR-106b的表达水平比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。转染3 d后,过表达miR-106b的HCC细胞增殖加快,抑制miR-106b的HCC细胞增殖减慢。过表达miR-106b的HepG2和QGY-7703细胞形成克隆的数目分别是对照组的(4.13±0.75)倍和(3.78±0.47)倍,在软琼脂中形成>1.0 mm克隆的数目分别为(147.73±15.56)个和(138.87±15.58)个;抑制miR-106b表达HepG2和QGY-7703细胞株形成克隆的数目分别是阴性对照组的(0.18±0.05)和(0.24±0.07)倍,形成>1.0 mim克隆的数目分别为(23.29±7.14)个和(20.60±8.07)个。与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。BrdU竞争掺入实验结果显示,过表达miR-106b的HepG2和QGY-7703细胞中BrdU阳性率分别为(51.89±4.91)%和(54.74±6.10)%,抑制miR-106b表达的HepG2和QGY-7703细胞的BrdU阳性率分别为(6.48±3.15)%和(7.52±2.03)%,与亲代细胞的BrdU阳性率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,过表达miR-106b使HepG2和QGY-7703细胞S期细胞所占比例分别由29.93%和31.04%,升高到56.76%和57.22%。抑制miR-106b表达的HepG2和QGY-7703细胞中S期细胞所占比例为19.43%和19.92%。结论 miR-106b过表达可促进HCC细胞增殖和转移,其机制可能是通过促进细胞进入S期、抑制细胞凋亡实现。

• 单位
  广州医学院第二附属医院; 广州市妇女儿童医疗中心