PCR法制备地高辛标记探针原位杂交在人结核杆菌Edman株基因检测中的应用

作者：符蓉; 谭笑

来源：实用预防医学, 2009, (03): 913-915.

• 结核分枝杆菌
• Ag85A
• PCR
• 地高辛标记探针
• 原位杂交 Mycobacterium tuberculosis
• Ag85A
• PCR
• Digoxigenin labeled probe
• Situ hybridization

目的建立一种用于临床上检测人感染结核杆菌Edman株的快速敏感的PCR探针原位杂交方法。方法根据NCBI报道的人结核杆菌编码序列,以结核杆菌Edman株Ag85A基因150~841 bp之间的基因序列为靶序列,采用PCR法制备对人结核杆菌特异性高的地高辛标记DNA探针(690 bp),并对探针进行电泳和测序鉴定。分离培养结核杆菌,通过原位杂交检测所制备探针的特异性;对结核杆菌做10倍比稀释,运用探针对其进行敏感性检测。结果所制备的探针对结核杆菌的杂交反应呈阳性,以dNTP代替地高辛标记探针作为对照组的杂交反应为阴性;通过基因序列测定证实了PCR产物的特异性;PCR法制备地高辛标记探针原位杂交法...

• 单位
  湖南省人民医院