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摘要
目的:评估利用质粒连接克隆技术提高稀有细胞全基因组扩增（WGA）产物覆盖率及质量的可行性。方法:以54例宫颈脱落滋养层细胞和循环肿瘤细胞的WGA产物为研究对象，利用质粒连接克隆技术，通过质粒载体pMDTM19-T将单细胞WGA产物转入大肠杆菌DH5α感受态细胞进行增殖获取WGA产物的克隆产物。设计22条常染色体中22个特定位点引物进行扩增，根据扩增阳性率计算单细胞WGA产物克隆前后的覆盖率，并利用配对t检验及散点图进行统计学分析。随机选取样本，利用Sanger测序和短串联重复序列技术进行产物质量验证。结果:克隆后单细胞WGA产物的覆盖率有所提高（克隆前73%、克隆后79%）,尤其对宫颈脱落滋养层细胞效果更为显著（克隆前72%、克隆后81%）;在随机选取的12例样本中，克隆后样本的Sanger测序峰图质量和成功率均优于克隆前；此外，随机选取的2例克隆后的样本检测出的STR基因座均显著多于克隆前的。结论:质粒连接克隆法在一定程度上能提高单细胞WGA产物覆盖率及质量，有助于更深入地研究稀有细胞的生物学意义及临床价值。
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