西瓜枯萎病菌快速LAMP检测体系的建立

作者：杨科; 肖姬玲; 张屹; 魏林; 梁志怀^*

来源：农业生物技术学报, 2021, 29(09): 1836-1844.

• 西瓜
• 尖孢镰刀菌西瓜专化型(FON)
• 环介导等温技术(LAMP)
• DNA简提法

由尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium oxysporum f. sp. niveum, FON)引起的西瓜枯萎病(Fusarium wilt of watermelon)是西瓜(Citrullus lanatus)上的主要病害,在我国西瓜种植区均有发生,建立西瓜枯萎病菌的快速检测方法对该病的诊断和防控十分重要。FON是造成西瓜枯萎病的主要病原真菌。本研究以FON的特异DNA片段为靶标,设计了一套灵敏、特异的快速环介导等温技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)引物,并结合DNA快速提取方法,建立了西瓜枯萎病菌的LAMP检测体系。引物特异性实验结果显示,唯有FON-0、FON-1、FON-2的LAMP检测结果呈现黄绿色,且LAMP产物琼脂糖凝胶电泳结果呈现梯形条带,说明引物具有较高特异性。灵敏度检测结果表明,此LAMP体系对FON-1基因组DNA的检测下限为10 pg/μL,对植物带菌量的检测下限为5×102孢子/g。盆栽实验结果表明,以根部组织为样品,此体系能对西瓜幼苗是否被FON侵染作出正确判断。该体系从DNA提取到获得检测结果仅需90 min左右,且病原菌菌丝和植物组织均可作为检测材料。反应结果肉眼可辨,具有操作简单、特异性强、灵敏度高、稳定性强、应用性广的特点。本检测体系可为田间西瓜枯萎病菌的快速诊断提供技术支撑。

• 单位
  湖南省农业生物技术研究所; 湖南大学; 湖南省植物保护研究所