敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建

作者：饶凤琴; 程玉梅; 吴昌学; 王义; 崔古贞; 齐晓岚^*; 洪伟^*

来源：贵州医科大学学报, 2019, 44(10): 1128-1133.

DOI：10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.10.003

• 艰难梭菌
• CRISPR-Cpf1系统
• PaLoc毒力岛
• 基因敲除
• 活菌疫苗
• 毒性基因
• 梭菌感染
• 载体
• 质粒

目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换。结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50%;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换。结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株。

• 单位
  基础医学院; 贵州医科大学