Tie2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定

作者：郑厚兵; 单秀英; 刘照亮; 王彪; 郭国祥; 张炜强; 庄福连

来源：中国现代医学杂志, 2011, (24): 2969-2973.

• RNA干扰
• 促血管生成素2
• Tie2受体
• 慢病毒载体
• 质粒载体 RNA interference
• angiopoietin2
• receptor Tie2
• lentiviral vector
• plasmid vector

目的构建并鉴定Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达载体。方法先构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,通过XbaⅠ酶切电泳及测序鉴定,再以pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,pVSVG包膜质粒和pHelper包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度。结果成功构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过XbaⅠ酶切及测序鉴定,Tie2-siRNA核苷酸序列插入正确,利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Tie2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL。结论成功构建了...

• 单位
  福建医科大学附属第一医院