奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯菌MrkD基因的原核表达及对乳腺上皮细胞黏附的研究

作者：崔琦; 周雅坪; 郭婷; 武春霞; 王宇琛; 田广原; 思汗; 孙衍立; 郝永清^*

来源：中国预防兽医学报, 2021, 43(12): 1312-1317.

• 奶牛乳房炎
• 肺炎克雷伯菌
• 原核表达
• MrkD基因
• 黏附

为探究奶牛乳房炎源性肺炎克雷伯菌(K.pn)黏附素MrkD蛋白对K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞的影响以及黏附素抗血清对阻断K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞的效果，本研究利用PCR扩增了K.pn MrkD基因，构建重组质粒pColdI-MrkD，将其转化至大肠杆菌后诱导表达，采用SDS-PAGE和western blot鉴定。结果显示，MrkD重组蛋白以可溶性形式表达，并具有较好的反应原性。将牛乳腺上皮细胞与1×108cfu/mL K.pn稀释液共同孵育后，利用间接免疫荧光试验检测K.pn对奶牛乳腺上皮细胞的黏附，结果显示K.pn可以黏附奶牛乳腺上皮细胞。利用K.pn稀释液孵育经不同浓度MrkD重组蛋白作用的奶牛乳腺上皮细胞后，通过对黏附细菌数的统计和分析，结果表明MrkD重组蛋白可以显著抑制K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞。利用MrkD重组蛋白抗血清和K.pn抗血清分别与K.pn作用后计数黏附的奶牛乳腺上皮细胞，结果显示，MrkD重组蛋白抗血清与K.pn抗血清均能有效阻断K.pn的黏附，且重组蛋白抗血清效果较好。本研究获得了MrkD重组蛋白，首次检测了其在K.pn黏附奶牛乳腺上皮细胞中的影响以及该重组蛋白抗血清在阻断K.pn黏附细胞中的作用，为探究阻断细菌黏附以及奶牛乳房炎亚单位疫苗的研究奠定基础。

• 单位
  内蒙古农业大学; 呼伦贝尔市动物疫病预防控制中心