重组hPRL-1的表达纯化及其理化和酶学性质研究

作者：巴特

来源：现代生物医学进展, 2007, (12): 1824-1828.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2007.12.053

• hPLR-1
• 动力学
• pNPP
• 4-MUP
• DiFMUP hPRL-1
• kenetics
• DiFMUP

目的:表达纯化hPRL-1重组蛋白,分析其理化性质及酶学特性。方法:热激法将重组pET15b质粒转化入E.coli BL21中,IPTG诱导表达出His-tagged hPRL-1蛋白。使用Ni-NTA亲和层析法结合Mono Q离子交换层析法纯化。用SDS-PAGE法和Western Blot法进行表达情况的定性定量分析,并使用HPLC法鉴定蛋白纯度,计算出蛋白分子量,圆盘等电聚焦电泳分析重组蛋白等电点。比较分析以pNPP、4-MUP和DiFMUP为底物时的酶促反应动力学。同时以pNPP为底物测定酶的最适pH值;以4-MUP为底物测定酶的最适温度,分析探讨缓冲液离子强度与蛋白酪氨酸酶通用抑制剂...