ALV-J/K双重荧光定量PCR检测方法的建立

作者：郭妍妍; 董欣怡; 黄健意; 李锦群; 廖明; 曹伟胜^*

来源：养禽与禽病防治, 2022, (08): 2-8.

• ALV-J
• ALV-K
• 双重荧光定量PCR

为建立可同时检测临床上主要流行的J、K亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J/K, ALV-J/K),选取ALV-J(CHN06)pol基因3′端和gp85编码基因之间的保守区域及ALV-K(GDFX0601)gp85编码基因保守区域设计引物和TaqMan探针,经过优化反应条件,建立了可同时检测ALV-J和ALV-K的双重荧光定量PCR方法,并通过特异性实验、灵敏性实验和稳定性实验对该方法进行评估。结果显示,该方法仅能特异性扩增ALV-J和ALV-K,与A、B、E亚群ALV及其他常见禽类病毒等均无交叉反应;其最低检测限度为3.16×101 copies/μ L,比普通PCR灵敏性高100倍;其批内与批间变异系数均小于2%;将101份血浆样品接种DF-1细胞,并分别通过ALV-J/K双重荧光定量PCR、ALV p27 ELISA和普通PCR检测,结果显示,3种检测方法的总阳性率分别为17.8%(18/101)、10.9%(11/101)和10.9%(11/101)。以上结果表明,该方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,可为ALV-J和ALV-K的诊断提供技术支持。

• 单位
  华南农业大学; 人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室; 农业部; 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室