人皮肤表皮干细胞外泌体的分离培养与鉴定

作者：李碧优; 马洁; 张启宇; 章华兵^*; 朱云平^*

来源：安徽医科大学学报, 2023, 58(02): 224-229.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2023.02.009

• 外泌体
• 人表皮干细胞
• 超速离心
• 再生医学

目的 通过优化技术流程，探究人皮肤表皮干细胞(EPSCs)体外分离培养及表皮干细胞外泌体(EPSCs-Exo)分离纯化的方法。方法 首先通过优化人源EPSCs的分离酶，运用改良的无血清培养液，添加10种因子刺激EPSCs生长，促进其分泌EPSCs-Exo,同时维持EPSCs干性和增殖性，延缓EPSCs的分化和成熟。进一步优化差速离心的条件，高效高纯度提取人源的EPSCs-Exo。对人皮肤组织进行免疫荧光染色溯源EPSCs;对分离的EPSCs进行Western blot和免疫荧光染色检测其表面多个标志物；对EPSCs-Exo从形态、粒径大小、多个胞内和膜上标志物进行鉴定。结果 人皮肤组织分层表达表皮细胞的标志物，EPSCs高表达整合素α6(integrin-α6)、整合素β1(integrin-β1)、P63蛋白(P63)、细胞角蛋白19(CK19)等标志物，EPSCs上清液超速离心后的透射电镜显示茶托状结构，粒径大小检测直径介于30～150 nm，蛋白印迹显示Tsg101、CD9、CD63(溶酶体相关膜蛋白3)呈阳性，Calnexin、GAPDH呈阴性。结论 该研究成功在体外分离培养了人源EPSCs并获得人源EPSCs-Exo。

• 单位
  蛋白质组学国家重点实验室; 安徽医科大学; 基础医学院; 北京协和医院