忽地笑α-葡萄糖苷酶2编码基因的分子克隆与原核表达

作者：李宜奎; 李洁; 程丽; 钱彬彬; 汪仁^*

来源：安徽农业科学, 2018, 46(36): 78-89.

DOI：10.13989/j.cnki.0517-6611.2018.36.022

• 忽地笑
• α-葡萄糖苷酶2
• 分子克隆
• 原核表达

[目的]克隆忽地笑[Lycoris aurea (L’Hér.) Herb.]α-葡萄糖苷酶2编码基因。[方法]基于忽地笑的转录组数据库,分析功能注释为α-葡萄糖苷酶2的基因片段,通过设计特异性定量PCR扩增引物分析其在各组织中的表达丰度,利用RACE (rapid-amplification of c DNA ends)技术从高丰度组织中克隆获得忽地笑α-葡萄糖苷酶2编码基因。[结果]忽地笑α-葡萄糖苷酶2编码基因Lau Agl2 c DNA全长3 185 bp,开放阅读框为2 961 bp,编码含有986个氨基酸残基的Lau Agl2蛋白质。Lau Agl2蛋白质氨基酸序列具有α-葡萄糖苷酶Ⅱ特征性的保守结构域和天冬氨酸残基组成的活性中心,还具有一些蛋白质糖基化的潜在位点(N-X-S/T共有序列)。Lau Agl2蛋白质与油棕、陆地棉等其他植物的α-葡萄糖苷酶2的氨基酸序列一致性为73.0%以上。利用p ET表达系统,可以在大肠杆菌中实现Lau Agl2蛋白质的诱导表达。[结论]成功从忽地笑花葶和花瓣中克隆到α-葡萄糖苷酶2编码基因Lau Agl2并在大肠杆菌中对Lau Agl2进行了异源表达,为Lau Agl2蛋白质的功能鉴定及其在忽地笑种子萌发与生长发育中的作用研究奠定了基础。

• 单位
  江苏省中国科学院植物研究所