人趋化因子CCL3L1融合蛋白表达和活性分析

作者：徐斌; 石英; 李俊红; 张薇; 赵国庆; 陈德喜; 吴昊

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2007, 27(08): 688-692.

DOI：10.3760/j.issn:0254-5101.2007.08.003

• CCL3L1
• HIV
• AIDS
• CCR5
• 趋化因子

目的人趋化因子CCL3L1进行融合蛋白原核表达和真核表达,纯化后活性分析。方法克隆人类CCL3L1 cDNA,构建两种CCL3L1表达载体,获得两个CCL3L1融合蛋白,一个在BL21大肠杆菌表达的GST-CCL3L1融合蛋白,另一个在S2果蝇细胞表达的His-CCL3L1融合蛋白。同时克隆了pcDNA3.1-flag-CCR5表达载体,培养了稳定表达flag-CCR5的细胞株,进行人趋化因子CCL3L1活性分析。结果成功构建人趋化因子CCL3L1融合蛋白原核表达载体pGEX-4T和真核表达载体pMT/ BiP/V5-His,免疫沉淀法检测和Western blot法分析His-CCL3L1蛋白在浓度1nmol/L到50 nmol/L存在剂量依赖性,浓度50 nmol/L到100 nmol/L没有剂量依赖性。纯化的His-CCL3L1蛋白能特异性结合CCR5受体。结论成功表达了融合蛋白GST-CCL3L1和His-CCL3L1,果蝇细胞表达的His-CCL3L1蛋白具有与天然CCL3L1相同的生物学活性,为进一步制备CCL3L1单克隆和多克隆抗体及研究CCL3L1影响HIV-1感染的机制提供基础资料。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院