致小鼠脾脏T细胞凋亡日本血吸虫虫卵抗原蛋白的筛选

作者：王燕娟^*; 曹建平

来源：中国病原生物学杂志, 2023, 18(01): 37-41.

DOI：10.13350/j.cjpb.230107

• 日本血吸虫
• 虫卵可溶性抗原
• T淋巴细胞
• 凋亡

目的 观察日本血吸虫虫卵致小鼠脾脏淋巴细胞凋亡情况，筛选SEA中致脾脏T细胞凋亡的蛋白组分。方法 采用TUNEL(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP nick end labeling, TdT介导的dUTP缺口末端标记法)检测日本血吸虫感染鼠脾脏虫卵肉芽肿细胞凋亡情况。制备日本血吸虫可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen, SEA)并免疫小鼠。将小鼠处死，取脾，制备脾细胞悬液，分别以15、30、60μg/mlSEA刺激脾脏细胞，流式观察脾脏淋巴细胞凋亡情况。用层析柱及超滤管按分子质量将SEA初步分离为4个分子区段，蛋白分别富集于Fr1,>55 ku; Fr2,30～70 ku; Fr3,5～30 ku; Fr4,<5 ku。体外分离培养免疫小鼠脾脏细胞，分别加入60μg/ml的不同SEA区段分子，培养48 h后以Annexin V标记进行流式检测，采用DNA ladder法和RT-PCR检测T细胞中Fas, FasL mRNA水平。将致凋亡作用显著的SEA区段进行SDS-PAGE,电洗脱富集不同亚区段蛋白，再与T细胞共同培养，观察T细胞凋亡比例，进一步缩小蛋白范围区间。结果 TUNEL法检测日本血吸虫感染后8周小鼠脾脏虫卵肉芽肿虫卵周围有细胞凋亡，免疫小鼠T淋巴细胞在60μg/ml浓度下凋亡比例显著高于其他浓度组，流式检测、DNA ladder法及定量PCR结果均表明Fr1蛋白组分致T细胞凋亡作用最强。将SDS-PAGE电泳后的Fr1分子进行电洗脱，富集不同亚区段蛋白(Fr1-1,Fr1-2,Fr1-3),以60μg/ml的浓度刺激T细胞48 h, Annexin V法显示Fr1-2(55～72 ku亚蛋白区段)致T细胞凋亡率达57.04%,致凋亡效果最为显著(P<0.01)。结论 虫卵周围高浓度SEA有致小鼠脾脏T细胞凋亡作用，以55～72 ku蛋白区段致凋亡作用最强，可进一步从中筛选疫苗靶蛋白。

• 单位
  上海城建职业学院; 血吸虫病和丝虫病合作中心; 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所; 卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室