GCaMP基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像研究

作者：宋蔚林; 赵从健; 阴正勤; 王一

来源：第三军医大学学报, 2015, 37(11): 1064-1069.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201502114

• C17.2神经干细胞
• GCaMP
• GECI
• Fluo-4 AM

目的研究GCa MP(属于基因编码钙指示剂/蛋白钙指示剂)基因工程化的C17.2神经干细胞的钙离子成像。方法用慢病毒转染C17.2细胞,获得稳定表达GCa MP基因的C17.2-GCa MP细胞。Real-time PCR定量检测C17.2细胞及C17.2-GCa MP细胞中神经干细胞标志物巢蛋白(nestin)的表达情况。将C17.2细胞(Fluo-4 AM染色后)和C17.2-GCa MP细胞置于定制数字荧光显微镜下进行钙离子荧光检测。结果 Real-time PCR检测结果提示C17.2细胞及C17.2-GCa MP细胞中nestin表达差异无统计学意义(P>0.05)。C17.2-GCa MP细胞较Fluo-4 AM染色C17.2细胞钙离子荧光锐波(spike)波形持续时间长且相对荧光强度强(P<0.05),在Fluo-4 AM染色C17.2细胞中能观察到钙离子荧光慢波(wave)波形,而C17.2-GCa MP wave波形不典型。结论 C17.2-GCa MP细胞在保持神经干细胞干性的同时能够监测细胞内钙离子变化,能够运用于神经干细胞移植治疗视网膜色素变性功能整合的研究。

• 单位
  第三军医大学西南医院