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摘要
目的建立白细胞介素-1β(IL-1β)诱导退变的软骨细胞模型,研究富硒黄芪皂苷调节软骨细胞增殖治疗膝骨关节炎(KOA)的作用及其机制。方法将培养的第3代大鼠软骨细胞分为7组:空白对照组、模型组和更低、低、中、高和更高5个剂量实验组。除空白对照组(加入软骨细胞)以外,其他各组分别用IL-1β10 ng·mL-1诱导48 h,获得退变软骨细胞模型。空白对照组和模型组均加入含10%小牛血清的DEME培养基,5个剂量实验组分别加入富硒黄芪皂苷25,50,100,200,300 mmol·L-1。经验证选择干预48 h的中剂量实验组进行后续实验。用噻唑蓝法检测细胞增殖(OD值)情况,用免疫组化法检测Ⅱ型胶原、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达水平(灰度值),实时荧光定量-PCR法检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)基因表达水平(2-ΔΔCt )。结果空白对照组、模型组和中剂量实验组于48 h的细胞增殖水平分别为0.41±0.04,0.12±0.02和0.38±0.02;这3组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平分别为153.21±48.91,82.15±34.22和213.74±52.37;这3组的Bcl-2蛋白表达水平分别为78.43±15.33,36.27±10.43和58.27±11.59;这3组的Bax蛋白分别为25.41±8.14,52.53±12.32和30.91±7.18;这3组的Caspase-3蛋白表达水平分别为31.25±8.25,80.72±12.46和52.71±10.53;这3组的PI3K基因表达水平分别为1.00±0.03,2.75±0.02和1.14±0.01;这3组的Akt基因表达水平分别为1.00±0.04,1.83±0.07和1.13±0.04。上述指标:模型组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);中剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论富硒黄芪可调节软骨细胞增殖,这可能通过PI3K/Akt途径发挥作用。
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