肠膜明串珠菌ATCC8293中乳酸脱氢酶的特性

作者：李玲; 龚金炎; 袁海娜; 方若思; 楚秉泉; 肖功年^*; Namsoo HAN^*

来源：食品科学, 2020, 41(18): 153-158.

• 肠膜明串珠菌
• 乳酸脱氢酶
• 乳酸
• 苯乳酸

将肠膜明串珠菌ATCC8293中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因ldh克隆至载体pETDuetTM-1,构建重组表达载体pETldh(6 394 bp)并转化到Escherichia coli BL21(DE3)中实现表达。经Ni-NTA柱亲和层析得到较纯的重组LDH,进行酶学性质研究。结果表明,LDH的蛋白分子质量为37 kDa,最适pH值为7.0,温度40℃。在最适酶活力测定条件下,LDH比活力为67.45 U/mg,也证实该酶是转化丙酮酸为D-乳酸的D-LDH。此外,LDH对丙酮酸和还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的Km分别为1.27 mmol/L和0.48 mmol/L,对丙酮酸的Kcat和Kcat/Km分别为421 s-1和3.31×105 L/(mol·s)。除将丙酮酸作为底物外,对草酰乙酸和苯丙酮酸也具有较强的催化能力。本研究结果为利用肠膜明串珠菌生产乳酸和苯乳酸提供一定理论依据。

• 单位
  浙江科技学院