基于VEGF/MAPKs通路探讨益肾养肝明目方对RPE细胞凋亡作用的影响

作者：龚雁^*; 李萌; 廖燕红; 高健; 章晓林; 王桑桑

来源：中国中医眼科杂志, 2023, 33(11): 1007-1013.

DOI：10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2023.11.002

• 益肾养肝明目方
• VEGF
• MAPKs
• 人视网膜色素上皮细胞
• 氧化应激

目的 探讨益肾养肝明目方(YYM)对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的保护作用及药理机制。方法 常规培养ARPE-19细胞，筛选H2O2、康柏西普和YYM的最佳浓度，之后将细胞分为空白组(BG)、模型组(MG)、益肾养肝明目方组(YYM)、阳性对照药康柏西普组(CB)、益肾养肝明目方+康柏西普组(YYM+CB)、益肾养肝明目方对照组(YYM-CG)，以400μM H2O2、2μg/mL康柏西普和40μg/mL YYM的最佳浓度处理。使用相差显微镜观察各组ARPE-19细胞形态，流式细胞仪检测细胞凋亡率，化学荧光法检测细胞活性氧(ROS)表达，Western Blot检测血管内皮生长因子/丝裂原活化蛋白激酶(VEGF/MAPKs)通路相关蛋白外源性调节蛋白激酶1/2(eERK1/2)、B细胞淋巴瘤蛋白-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X(Bax)、细胞色素c(Cyc)表达。结果 (1)细胞形态：MG组细胞出现皱缩，部分脱落；而YYM、CB组的细胞损伤明显减少，凋亡细胞数量下降。(2)细胞凋亡：与BG组比较，MG组细胞凋亡率较高(t=12.408,P=0.000)；与MG组比较，YYM、CB、YYM+CB组细胞凋亡率均降低(tYYM=6.023,tCB=5.967,tYYM+CB=9.804，均P=0.000)。(3)ROS：与BG组比较，MG组ROS表达较高(t=14.388,P=0.000)；与MG组比较，YYM、CB、YYM+CB组ROS表达较低(tYYM=8.621,tCB=8.774,tYYM+CB=12.620，均P=0.000)。(4)VEGF/MAPKs：与BG组比较，MG组VEGF、p-p38 MAPKs、p-SAPK/JNK、p-ERK1/2、Bax、Bcl-2、Cyc蛋白表达均较高(tVEGF=18.569,tp-p38 MAPK=22.097,tp-SAPK/JNK=17.548,tp-ERK1/2=18.567,tBax=20.575,tBcl-2=18.879,tCyc=28.196，均P=0.000)；与MG组比较，YYM、CB、YYM+CB组VEGF、p-p38 MAPK、p-SAPK/JNK、p-ERK1/2、Bax、Bcl-2、Cyc蛋白表达均较低(YYM组：tVEGF=9.493,tp-p38 MAPK=8.942,tp-SAPK/JNK=8.683,tp-ERK1/2=8.929,tBax=8.849,tBcl-2=4.863,tCyc=11.832，均P=0.000;CB组：tVEGF=16.065,tp-p38 MAPK=16.033,tp-SAPK/JNK=15.558,tp-ERK1/2=13.890,tBax=16.043,tBcl-2=6.579,tCyc=22.028，均P=0.000;YYM+CB组：tVEGF=18.569,tp-p38 MAPK=21.378,tp-SAPK/JNK=17.005,tp-ERK1/2=16.583,tBax=20.071,tBcl-2=11.442,tCyc=26.560，均P=0.000)，差异均有统计学意义。结论 YYM能通过调控VEGF/MAPKs通路相关蛋白的表达，降低H2O2诱导RPE细胞凋亡率和ROS表达，减轻氧化应激损伤，且联合康柏西普使用效果更佳。

• 单位
  宁波大学; 爱尔眼科医院; 宁波市眼科医院