减毒鼠伤寒沙门菌三型分泌表达系统的构建及其特性

作者：郁川; 翟崇凯; 廖成水; 余祖华; 何雷; 贾艳艳; 李静; 张春杰; 程相朝

来源：生物工程学报, 2016, 32(12): 1664-1675.

DOI：10.13345/j.cjb.160143

• 减毒鼠伤寒沙门菌
• 三型分泌系统
• sop E基因
• 平衡致死系统
• 活疫苗载体

为开发新型重组减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗载体,本研究以pYA3493质粒为基础,用鼠伤寒沙门菌sopENt100基因及其启动子替代原有的Ptrc启动子,构建沙门菌三型分泌表达载体pYA-sopENt100;再将质粒pYA-sopENt100电转入沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,构建减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop ENt100)三型分泌表达系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因egfp克隆入sop E基因下游,构建重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop ENt100-egfp),感染Vero细胞,用Western blotting分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop ENt100)三型分泌表达系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株Δcrp SL1344及野生株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢;重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop ENt100)的LD50较野生株SL1344降低了7.0×104倍;Western blotting结果发现,重组菌培养上清中能检测到Sop ENt100-egfp融合蛋白（37 k Da）;重组菌株感染Vero细胞后,可以同时检测到Sop ENt100-egfp融合蛋白（37 k Da）和EGFP蛋白（27 k Da）。以上结果证实,本研究成功构建了新型减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd(p YA-sop ENt100)三型分泌表达系统,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。

• 单位
  洛阳职业技术学院; 河南科技大学; 动物科技学院