益气活血化痰方作用于巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2信号通路抗动脉粥样硬化的实验研究

作者：黄宇; 赵汉君; 苏立杰; 陈婕; 阮小芬; 姚轶立; 王肖龙; 薛金贵^*

来源：中西医结合心脑血管病杂志, 2022, 20(05): 835-840.

• 动脉粥样硬化
• 益气活血化痰方
• 外泌体
• miRNA-let-7-5p
• TAB2
• 实验研究

目的 通过验证巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2的信号通路,探寻益气活血化痰方抗动脉粥样硬化(AS)的分子机制,为益气活血化痰方抗AS提供依据。方法 小鼠巨噬细胞RAW 264.7培养与构建AS模型细胞并分组;巨噬细胞外泌体的提取;免疫印迹法(Western Blot)测定外泌体标记表达,评价外泌体的质量;提取总RNA,反转录,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miRNA表达;双荧光素酶报告基因检测实验分析miRNA-let-7-5p与预测的靶向基因之间的结合关系;益气活血化痰方干预过的小鼠大动脉组织芯片进行比对,寻找差异性基因。结果 (1)外泌体的鉴定:对照组(RAW264.7+磷酸缓冲盐溶液)与AS模型组细胞上清液中CD_(61)与CD_(81)几乎没有表达,而对照组(RAW264.7+磷酸缓冲盐溶液)与AS模型组提取的外泌体中CD_(61)与CD_(81)均高表达,表明外泌体提取成功。(2)外泌体微小RNA(miRNA))qPCR Array与生物信息学分析:检索3个与AS相关的数据库,有12个miRNA共存在于这3个数据库。(3)通过芯片分析这12个miRNA在外泌体中的表达,与对照组相比,外泌体组有4个miRNA(miRNA-885、miRNA-21、miRNA-451与miRNA-let-7-5p)表达异常。(4)外泌体与主动脉内皮细胞(HAEC)共培育后,RT-qPCR检测m iRNA表达,与HAEC组相比,只有miRNA-let-7-5p在外泌体与HAEC共培养组中显著表达。(5)生物信息学分析差异mi RNA-let-7-5p调控的靶向基因;应用双荧光素酶报告基因实验分析验证miRNA-let-7-5p与预测的靶向基因之间的结合关系,发现TAB2为miRNA-let-7-5p的靶基因。在HAEC中,过表达miRNA-let-7-5p抑制了TAB2的表达。通过查找益气活血化痰方干预过的小鼠大动脉组织芯片,发现miRNA-let-7-5p和TAB2均为差异性基因。结论 益气活血化痰方可能通过作用于巨噬细胞外泌体mi RNA-let-7-5p/T AB2的信号通路发挥抗AS作用。

• 单位
  周浦医院; 上海中医药大学附属曙光医院; 上海健康医学院