大鼠PER2基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率的测定

作者：王翔凌; 孙宁玲; 马丽萍; 郭晓夏; 姜娟; 王鲁雁; 何湘君

来源：西安交通大学学报（医学版）, 2014, 35(01): 16-21.

• PER2基因
• RNA干扰
• 慢病毒载体
• 血管平滑肌细胞
• 时钟基因

目的构建及筛选有效干扰大鼠血管平滑肌细胞PER2基因的shRNA慢病毒载体,并测定其干扰效率。方法设计大鼠PER2的siRNA靶序列,插入慢病毒载体质粒pGLV-U6-EGFP中,构建pLentivirus-per2-rat表达重组体并转染至A7r5大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞内,利用Real-time PCR方法检测PER2基因的mRNA表达水平,筛选有效沉默钟基因PER2表达的RNAi慢病毒载体。结果经电泳、基因测序证实插入的目的序列正确,有PER2表达,成功构建了pLentivirus-per2-rat表达重组体;转染慢病毒载体pLentivirus-per2-rat至A7r5大鼠胸血管平滑肌细胞,测定转染效率达70%;Real-time PCR检测PER2基因的mRNA相对表达量,筛选出有效干扰大鼠血管平滑肌细胞钟基因Per2表达的siRNA片段,使PER2mRNA表达量下调约84%。结论成功构建了大鼠PER2的RNAi慢病毒载体,为进一步研究时钟基因的功能奠定了基础。

• 单位
  中心实验室; 北京大学人民医院; 卫生部北京医院