丝素蛋白-左旋聚乳酸微载体扩增脂肪来源干细胞的实验研究

作者：黄元亮; 穆琳; 林燕娴; 蒋海越; 滕利^*

来源：中国修复重建外科杂志, 2021, 35(05): 611-619.

• 丝素蛋白-左旋聚乳酸
• 微载体
• 动态培养
• 脂肪来源干细胞

目的探讨丝素蛋白-左旋聚乳酸(silk fibroin-poly-L-lactic acid,SF-PLLA)微载体对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的扩增作用及对其分化能力的影响。方法使用脂肪抽吸术患者自愿捐赠脂肪组织,经酶消化法提取ADSCs。取第3代ADSCs分别接种于CultiSpher G和SF-PLLA微载体(分别设为A、B组),细胞-微载体复合物应用旋转生物反应器培养,并采用正常二维平面传代培养的ADSCs作为对照组(C组)。应用扫描电镜观察两种微载体结构及细胞生长状况;Live/Dead染色观察细胞在两种微载体上分布及成活情况;DNA定量法检测两种微载体上细胞增殖情况;培养18 d实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测3组ADSCs成软骨、成骨、成脂相关基因表达,行流式细胞术鉴定MSCs表面标志物,并行成软骨、成骨、成脂三系分化鉴定。结果 ADSCs在两种微载体上均可黏附并实现高效扩增,扩增18 d时两种微载体上ADSCs总扩增量差异无统计学意义(P>0.05)。对扩增所得ADSCs行qRT-PCR检测示,与C组比较,B组成软骨相关基因(蛋白聚糖、软骨寡聚基质蛋白、软骨特异性基因SOX9)呈显著上调,A组成脂相关基因(过氧化物酶体增殖物激活受体γ、脂蛋白酯酶、脂联素基因)呈显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术检测与三系分化鉴定显示两种微载体扩增后细胞仍为ADSCs,仍具有三系分化能力。结论 SF-PLLA微载体可用于扩增ADSCs,且扩增所得细胞成软骨分化趋势显著提高,成脂分化趋势降低。

• 单位
  中国医学科学院整形外科医院