miR-216b对顺铂耐药胃癌细胞生物学行为的影响

作者：周京涛; 刘佳; 李亮; 李建刚; 努尔买买提·阿米都拉; 闫军; 寇旭东; 艾孜买提·艾海提; 马博^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2021, 35(08): 789-795.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2021.08.010

• 胃癌
• 顺铂
• 耐药
• miR-216b
• ATG5
• 自噬

目的探讨miR-216b对顺铂耐药的胃癌细胞增殖和凋亡的作用及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR法检测人胃黏膜细胞系GES-1、人胃癌细胞系SGC7901和胃癌顺铂耐药细胞系SGC7901/DDP的miR-216b相对表达量,采用Western blot法检测3种细胞ATG5蛋白相对表达量。SGC7901/DDP细胞加入不同浓度顺铂,采用CCK-8实验检测顺铂对细胞的半数抑制浓度,确定顺铂在后续实验中浓度。对数生长期SGC7901/DDP细胞随机分为空白对照组(正常培养)、agomir-NC组(转染agomir-NC)、agomir-miR-216b组(转染agomic-miR-216b)、antagomir-NC组(转染antagomir-NC)和antagomir-miR-216b组(转染antagomir-miR-216b),采用实时荧光定量PCR法检测5组细胞miR-216b相对表达量,采用Western blot法检测5组细胞LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、ATG5、P62蛋白相对表达量,采用CCK-8实验检测5组细胞活力,采用克隆形成实验检测5组细胞克隆细胞数,采用流式细胞术检测5组细胞凋亡率。采用荧光素酶报告实验检测miR-216b与ATG5的靶向结合。对数生长期SGC7901/DDP细胞随机分为agomir-NC+oe-NC组(转染agomir-NC和oe-NC)、agomir-MiR-216b+oe-NC组(转染agomir-miR-216b和oe-NC)和agomir-miR-216b+oe-ATG5组(转染agomir-miR-216b和oe-ATG5),采用实时荧光定量PCR法检测miR-216b相对表达量,采用Western blot法检测细胞ATG5蛋白相对表达量。结果 SGC7901/DDP细胞miR-216b相对表达量(0.26±0.04)低于SGC7901细胞(0.49±0.06)和GES-1细胞(1.00±0.05)(P<0.05),SGC7901细胞低于GES-1细胞(P<0.05);SGC7901/DDP细胞ATG5相对表达量(0.76±0.03)高于SGC7901细胞(0.47±0.03)和GES-1细胞(0.18±0.02)(P<0.05),SGC7901细胞高于GES-1细胞(P<0.05);顺铂对SGC7901/DDP细胞的半数抑制浓度为7.998μmol/L,顺铂在后续实验中使用浓度为8μmol/L;agomir-miR-216b组细胞miR-216b相对表达量(2.43±0.14)、细胞凋亡率[(28.37±1.61)%]和P62蛋白相对表达量(0.43±0.02)高于agomir-NC组[1.02±0.05、(14.34±0.97)%、0.23±0.03](P<0.05),细胞活力[(25.20±2.75)%]、克隆细胞数[(49.33±5.51)个]、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(0.22±0.02)和ATG5蛋白相对表达量(0.17±0.01)低于agomir-NC组[(51.39±3.05)%、(119.33±4.51)个、0.38±0.02、0.33±0.02](P<0.05);antagomir-miR-216b组细胞miR-216b相对表达量(0.33±0.02)、细胞凋亡率[(8.77±1.12)%]和P62蛋白相对表达量(0.12±0.02)低于antagomir-NC组[0.99±0.05、(14.40±1.06)%、0.22±0.01](P<0.05),细胞活力[(77.34±3.97)%]、克隆细胞数[(166.67±6.51)个]、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(1.84±0.07)和ATG5蛋白相对表达量(0.83±0.04)高于antagomir-NC组[(49.25±4.00)%、(116.00±4.58)个、0.36±0.02、0.34±0.02](P<0.05);空白对照组、agomir-NC组、antagomir-NC组组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。miR-216b靶向调控ATG5。agomir-miR-216b+oe-NC组和agomir-miR-216b+oe-ATG5组细胞miR-216b相对表达量高于agomir-NC+oe-NC组(P<0.05),agomir-miR-216b+oe-NC组与agomir-miR-216b+oe-ATG5组比较差异无统计学意义(P>0.05);agomir-miR-216b+oe-NC组细胞ATG5蛋白相对表达量低于agomir-NC+oe-NC组和agomir-miR-216b+oe-ATG5组(P<0.05),agomir-miR-216b+oe-ATG5组低于agomir-NC+oe-NC组(P<0.05)。结论 miR-216b可能通过靶向ATG5抑制自噬,促进细胞凋亡并抑制增殖,增加胃癌细胞对顺铂的敏感性。

• 单位
  新疆医科大学; 新疆医科大学第二附属医院