重叠PCR法构建宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M融合重组载体

作者：董巍檑; 向花花; 彭华; 龚咏晴; 周晶; 张宏全; 郭紫芬

来源：临床检验杂志, 2018, 36(02): 139-147.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2018.02.17

• EGFR基因
• 载体构建
• 宫颈癌
• 重叠PCR

目的构建包含与宫颈癌相关的EGFR基因G719S和T790M位点重组p MD19-exon18-exon20载体,为制备突变型EGFR基因重组载体提供模板。方法以健康人全血基因组DNA作为模板,设计2对有重叠互补区的特异性引物,对EGFR基因的exon18和exon20两片段分别进行扩增,用重叠PCR技术将exon18和exon20片段进行连接,再将连接产物exon18-exon20片段插入p MD19-T质粒,构建成野生型p MD19-exon18-exon20载体,转入至大肠埃希菌感受态细胞DH5α中进行表达,利用菌液PCR和基因组测序进行鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,exon18和exon20两位点扩增片段在778 bp和596 bp处有清晰的目的条带,两片段的融合产物exon18-exon20片段可在1 374 bp处见一清晰目的条带;经菌液PCR和基因组测序结果鉴定,EGFR基因融合重组质粒均与预期结果一致。结论利用重叠PCR法将exon18和exon20片段进行融合,且成功构建了EGFR基因重组表达载体。

• 单位
  南华大学附属第一医院; 南华大学