北京棒杆菌天冬氨酸激酶M372I-T379S双突变体的构建及其酶学性质

作者：高云娜; 韩彩静; 詹冬玲; 方丽; 闵伟红^*

来源：吉林大学学报(理学版), 2019, 57(05): 1267-1274.

DOI：10.13413/j.cnki.jdxblxb.2018448

• 天冬氨酸激酶
• 定点突变
• 酶动力学
• 酶学性质

为构建高酶活力天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK),并削弱或解除Lys(lysine)反馈抑制作用突变体,通过定点突变和高通量筛选技术构建突变体M372I,T379S和M372I-T379S,对野生型(WT)和突变体分别进行诱导表达、纯化及酶学性质表征.结果表明:突变体M372I,T379S和M372I-T379SAK与WTAK相比,Vmax分别提高了13.77,15.02,15.60倍,Km和n值均降低;最适pH值分别升高为8.0,8.5,8.5,且半衰期分别延长了1.0,0.9,2.3h;M372I-T379SAK最适温度为30℃,比WT AK高2℃;当浓度为1～10mmol/L时,突变体均削弱或部分解除了抑制剂Lys的反馈抑制作用.

• 单位
  吉林农业大学