脊髓小脑性共济失调3型真核表达载体的构建及在PC12中的表达

作者：谢秋幼; 梁秀龄; 李洵桦

来源：中风与神经疾病杂志, 2005, (05): 397-399+483.

• 脊髓小脑性共济失调
• 绿色荧光蛋白
• 三核苷酸重复
• 多聚谷氨酰胺疾病
• 动态突变

目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因、带有脊髓小脑性共济失调3型(SCA3)基因的真核细胞表达载体,并转染PC12细胞,观察外源基因的表达情况。方法将含有正常和突变SCA3基因的pcD-NA3．0-ataxin3Q28(基因内CAG重复28次)、pcDNA3．0-ataxin3Q84(基因内CAG重复84次)双酶切,水解片段插入pEGFP-C1,测序鉴定后脂质体转染法转染PC12细胞并优化转染条件,荧光显微镜观察EGFP的表达,Western印迹检测目的蛋白ataxin3的表达。结果真核表达载体pEGFPC1-ataxin3Q28、pEGFPC1-ataxin3Q84得以成功构建,EGFP及目的基因产物ataxin3Q28、ataxin3Q84顺利地在PC12细胞中表达,由此建立了SCA3的真核细胞表达模型。结论构建SCA3的真核表达载体并建立其细胞模型,对研究SCA3的发病机制有重要意义。

• 单位
  广州军区广州总医院; 中山大学附属第一医院