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摘要
几丁质脱乙酰酶（chitin deacetylase，CDA）能催化几丁质脱乙酰化产生壳聚糖，且在几丁质降解过程中发挥着重要作用。本研究通过分析甜菜夜蛾转录组得到编码甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶8基因的全长CDS序列，命名为SeCDA8（GenBank登录号为OL689577），其开放阅读框为1158 bp，编码385个氨基酸。NCBI Blast和系统进化分析表明其属于肠道特异CDA蛋白，与斜纹夜蛾CDA相似度最高，为83.38%。成功构建原核重组表达载体pET30a-SeCDA8，转化大肠杆菌E. coli Rosetta，经超声破碎后在沉淀中表达45 kDa的重组蛋白。分别以再生几丁质和胶体几丁质为底物，分析重组SeCDA8蛋白的几丁质结合活性，结果表明SeCDA8蛋白与两种几丁质的结合活性较弱，且与再生几丁质的结合活性较高于胶体几丁质。通过qRT-PCR方法对SeCDA8基因进行组织定位分析，结果表明其在前肠和中肠前部高表达，推测其可能与围食膜形成有关。通过探究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA8蛋白的几丁质结合活性和组织定位，为更加深入的探究第Ⅴ类CDA的生理功能提供了重要的理论依据。
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