淫羊藿次苷Ⅱ对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞中miR-181c及其靶基因KLF6、KLF9、KLF10和KLF15的表达影响研究

作者：关瑞礼; 雷洪恩; 唐渊; 方冬; 郑卫; 辛钟成

来源：中华临床医师杂志(电子版), 2016, 10(01): 56-61.

DOI：10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2016.01.013

• 淫羊藿次苷Ⅱ
• 内皮细胞功能障碍
• mi R-181c
• 晚期糖基化终产物
• KLF
• TXNIP

目的检测淫羊藿次苷Ⅱ(ICAⅡ)对糖尿病环境下人阴茎海绵体血管内皮细胞(HCECs)中mi R-181c及其靶基因KLF6、KLF9、KLF10和KLF15的表达影响。方法经分离鉴定的原代HCECs,随机分为三组:正常+BSA组(NC组)、AGE-BSA+高糖组(DM组),ICAⅡ治疗组(DM+ICAⅡ组)。蛋白印迹实验检测e NOS和RAGE蛋白水平;实时定量PCR检测mi R-181c在模型中的表达差异;生物学信息网站预测mi R-181c的靶基因;实时定量PCR检测对应靶基因在模型中的变化;蛋白印迹实验验证靶基因KLF6、KLF9及KLF6下游TXNIP蛋白表达水平差异。结果与NC组相比,蛋白印迹实验的DM组在AGE-BSA联合高糖刺激下,e NOS蛋白表达水平明显降低,而RAGE蛋白表达水平明显升高,表明成功构建用于模拟体内的糖尿病模型;而ICAⅡ干预后能够有效恢复e NOS和RAGE蛋白表达(P<0.05)。与NC组相比,实时定量PCR检测结果发现糖尿病环境下mi R-181c表达水平明显降低,而ICAⅡ治疗后可显著提高其表达水平(P<0.05);mi R-181c的靶基因KLF6和KLF9在DM组明显升高(P<0.05),而KLF10和KLF15的m RNA水平无显著差异(P>0.05);ICAⅡ干预后有效降低其KLF6和KLF9的m RNA表达水平(P<0.05)。蛋白印迹实验结果进一步验证了KLF6和KLF9的蛋白水平变化,与上述的KLF6和KLF9的m RNA表达变化结果一致。另外,KLF6作用的下游TXNIP蛋白水平变化在模型下呈现和其一样的变化趋势。结论 AGE-BSA联合高糖刺激下mi R-181c及其靶基因的显著表达差异揭示其参与内皮细胞损伤的发生发展,而ICAⅡ能够有效逆转上述变化,为进一步研究ICAⅡ与mi R-181c信号通路具体的作用机制提供前期依据。

• 单位
  北京大学第一医院