海藻酸钠/乙二醇壳聚糖双网络水凝胶对小鼠调节性T细胞免疫功能的影响

作者：陈坤威; 姚咏明

来源：解放军医学杂志, 2019, 44(02): 91-97.

• 调节性T细胞
• 海藻酸钠
• 乙二醇壳聚糖
• 双网络水凝胶
• 免疫调控
• 组织工程
• 生物材料

目的探讨海藻酸钠(Alg)/乙二醇壳聚糖(GC)双网络凝胶材料体外刺激对小鼠调节性T细胞(Treg)免疫功能的影响。方法制备Alg、GC单网络水凝胶材料及双网络(DN)水凝胶材料(Alg/GC),根据不同水凝胶材料将细胞分为Alg组、GC组、DN组及对照组。采用免疫磁珠分离法分选BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg,应用流式细胞术分析Treg叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)及细胞毒性T细胞相关抗原(CTLA-4)在不同时效(刺激24h或48h)、不同培养环境[有无多黏菌素B(PMB)]下的表达水平,以确定后续细胞培养时间以及是否选用含PMB的培养基;观察Treg与效应T细胞共培养后T细胞增殖活性改变;采用酶联免疫吸附分析(ELISA)技术检测Treg分泌白细胞介素(IL)-10、转化生长因子(TGF)-β及效应T细胞分泌IL-2、IL-4与干扰素(IFN)-γ的水平。结果选定实验条件为刺激24h,并使用含PMB的培养基。Alg/GC双网络水凝胶及GC单网络水凝胶作用24h后,与对照组[CTLA-4 (47.73±5.35)%,TGF-β(558.75±48.58)pg/ml]比较,CD4+CD25+Treg中CTL A-4的表达水平[DN组(92.21±2.97)%,GC组(95.99±2.79)%]明显升高,TGF-β分泌量[DN组(905.03±73.04)pg/ml,GC组(957.06±138.70)pg/ml]明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05),但各刺激组Foxp3表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。Alg/GC双网络水凝胶及GC单网络水凝胶刺激后,与对照组[(42.04±1.35)%]相比,Treg对效应T细胞增殖活性的抑制作用[DN组(37.22±1.39)%,GC组(35.20±2.03)%]均明显增强,共培养后效应T细胞分泌IL-4/IFN-γ比值[DN组(2.30±0.22),GC组(2.57±0.23)]明显升高,与对照组(1.45±0.27)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Alg/GC双网络材料可显著增强Treg介导的免疫抑制功能,其成分中单网络材料GC水凝胶可能发挥了主要作用。

• 单位
  解放军总医院; 温州医科大学附属第一医院