嗜麦芽窄食单胞菌磷脂酶D的异源表达与酶学性质

作者：韩青青; 孙建安; 刘振; **朝^*

来源：中国海洋大学学报(自然科学版), 2018, 48(S2): 23-30.

DOI：10.16441/j.cnki.hdxb.20180159

• 磷脂酶D
• 异源表达
• 酶学性质
• 嗜麦芽窄食单胞菌
• 磷脂酰丝氨酸
• DHA-PS

本文利用大肠杆菌异源表达系统,对来自于嗜麦芽窄食单胞菌OUCEst10的磷脂酶D基因进行了克隆表达,得到重组磷脂酶D-PLDEst10。通过酶联比色法、薄层层析法和高效液相法等检测,对磷脂酶D-PLDEst10的酶学性质进行了研究。PLDEst10的米氏常数和最大反应速率分别为Km=0.77mmol/L,Vmax=1.33mmol·(L·min)-1;PLDEst10催化水解反应的最适反应温度和pH分别为40℃和9.0,经稳定性测定发现,该酶在pH为6.0到9.0的范围放置12h以上,未造成对酶蛋白结构的显著破坏;但是当PLDEst10在40和45℃下放置30min时,酶活降低了50%左右,这些结果显示PLDEst10的pH耐受性好,而高温耐受性一般。在水-乙醚双相体系下进行催化转酯反应,能够合成功能性磷脂酰丝氨酸(PS)和富含二十二碳六烯酸的磷脂酰丝氨酸(DHA-PS),这为新型磷脂的制备提供了重要的工具酶。

• 单位
  中国海洋大学