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摘要
目的:通过网络药理学方法及实验验证探索知母治疗阿尔茨海默病（AD）的作用机制。方法:通过网络药理学筛选知母治疗AD的活性成分、作用靶点，蛋白质-蛋白质相互作用网络构建及核心靶点分析，并进行基因本体和京都基因和基因组百科全书通路富集分析。提取外周血淋巴细胞并构建淋巴母细胞样细胞系（LCL），建立LCL-SKNMC体外细胞模型。采用MTT法和CCK-8法分别检测SKNMC细胞和LCL的活性，7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）探针检测共培养模型中生成的活性氧，免疫荧光染色检测共培养模型中生成的β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)，蛋白质印迹法检测共培养模型中相关蛋白的表达。分别观察氧化应激、正常状态及热应激状态下N2线虫的寿命，DCFH-DA探针检测N2线虫生成的活性氧，瘫痪实验研究CL4176线虫的瘫痪时间，硫黄素S染色检测CL4176线虫咽部沉积的Aβ。结果:知母潜在活性成分15个及103个药物-疾病靶点，知母可能通过白蛋白、Akt1、肿瘤坏死因子、表皮生长因子受体、血管内表皮生长因子A、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、淀粉样前体蛋白（APP）、糖原合成激酶（GSK）3β等相关靶点发挥抗AD作用。知母药理作用主要涉及阿尔茨海默病、内分泌抵抗、胰岛素抵抗等生物过程，以及神经活性配体-受体相互作用、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-Akt信号通路、钙信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、神经营养因子信号通路等通路。体外实验显示，知母可减少LCL-SKNMC中活性氧生成和Aβ1-42的产生（均P<0.01），抑制β-分泌酶1、APP、Aβ1-42蛋白的表达（均P<0.05），上调PI3K、Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平（均P<0.05）。体内研究进一步证实，知母可延长应激状态及正常情况下线虫的寿命，减轻活性氧积累及Aβ沉积毒性。结论:知母可减少AD中Aβ的生成，抑制其诱导的氧化应激作用，这些作用可能是通过调控PI3K/AKT/GSK-3β通路实现的。
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